የሴረም ፕሮቲን በሴሉሎስ አሲቴት ሜምብራን ኤሌክትሮፊዮሬሲስ የመለየት ሙከራ

መርህ

ሴሉሎስ አሲቴት ፊልም ኤሌክትሮፊዮራይዝስ ሴሉሎስ አሲቴት ፊልምን እንደ ድጋፍ በመጠቀም ኤሌክትሮፊዮራይዝስ ዘዴ ነው.በኤሌክትሪክ መስክ እንቅስቃሴ ውስጥ የተከሰቱ ቅንጣቶች ወደ ተቃራኒው ኤሌክትሮድ የሚንቀሳቀሱበት ክስተት ኤሌክትሮፊዮሬሲስ ይባላል።እያንዳንዱ ፕሮቲን የተወሰነ የአይኦኤሌክትሪክ ነጥብ ስላለው፣ አንድ ፕሮቲን ከአይዞኤሌክትሪክ ነጥቡ ያነሰ ፒኤች ባለው መፍትሄ ውስጥ ከተቀመጠ ፕሮቲኑ በአዎንታዊ ኃይል ይሞላል እና ወደ አሉታዊ ኤሌክትሮድ ይሄዳል።በተቃራኒው ወደ አወንታዊው ምሰሶ ይንቀሳቀሳል.በኤሌክትሪክ መስክ ውስጥ የሚንቀሳቀሱ የፕሮቲን ሞለኪውሎች ፍጥነት ከሞለኪውሎች ቅርፅ እና መጠን ጋር ስለሚዛመድ የተለያዩ ፕሮቲኖች በኤሌክትሮፊዮርስስ ሊለያዩ ይችላሉ።ሴረም የተለያዩ ፕሮቲኖችን ይይዛል ፣ ሁሉም በ pH7.5 ወይም ከዚያ በታች የ isoelectric ነጥቦች አሏቸው።ሴረም በፒኤች 8.6 ቋት ውስጥ ኤሌክትሮፊዮራይዝስ እንዲሠራ ሲደረግ፣ ሁሉም የሴረም ፕሮቲኖች አሉታዊ ኃይል ይሞላሉ እና በኤሌክትሪክ መስክ ውስጥ ወደ አወንታዊ ጎን ይንቀሳቀሳሉ።የተለያዩ የሴረም ፕሮቲኖች በአንድ ፒኤች ላይ የተለያዩ ክፍያዎች ስላሏቸው ሞለኪውላዊ ቅንጣቶች መጠናቸው የተለያየ ነው, ስለዚህም የፍልሰት ፍጥነት የተለየ ነው, እና በኤሌክትሮፊዮሬሲስ ይለያሉ.የኢሶኤሌክትሪክ ነጥቦች እና የሴረም ፕሮቲኖች ሞለኪውላዊ ክብደቶች ከዚህ በታች ባለው ሠንጠረዥ ውስጥ ይታያሉ።

ሙከራው በደም ሴረም ውስጥ ያሉ የተለያዩ ፕሮቲኖችን ከሴሉሎስ አሲቴት ሽፋን (abbr. CAM) እንደ ድጋፍ ሰጪ ሚዲያ መለየት ነው።CAM የአረፋ ዓይነት ነው።eጥሩ ዩኒፎርም ያለው ፊልም, እና ውፍረቱ 0.1mm-1.5mm ነው, እሱም የተወሰነ የውሃ መሳብ አለው.

ለ CAM Electrophoresis ቁሳቁሶች፣ መሳሪያዎች እና ሬጀንቶች

ምሳሌዎች፡ጤናማ የሰው ደም ሴረም

መሳሪያ፡የኃይል አቅርቦት DYY-6C፣ electrophoresis ታንክ DYCP-38C፣ የላቀ የናሙና ጭነት WD-9404

ሬጀንቶች

1) ሴሉሎስ አሲቴት ሽፋን 7X9 ሴ.ሜ

2) ፒኤች 8.6 ባርቢቶል ቋት መፍትሄ (አዮኒክ ጥንካሬ 0.05-0.09, 0.06tid ጊዜ ነው.): 1,84g Diethyl ባርቢቱሪክ አሲድ ይውሰዱ, እና ከዚያ 1.03g Diethyl sodium pentobarbital ይውሰዱ, ለመሟሟት ጥቂት የተጣራ ውሃ ይጨምሩ እና ያድርጉ. እስከ 1000 ሚሊ ሊትር;

3) እድፍ: Ponceau S 0.2g, Trichloroacetic 3g, 100 ሚሊ ሜትር የተጣራ ውሃ ይጨምሩ;

4) TBS/T ወይም PBS/T: 45ml 95% ethanol, 5ml glacial acetic acid, 50ml የተጣራ ውሃ ይጨምሩ;

5) የጽዳት መፍትሄ: 70ml anhydrous ethanol, 30ml glacial አሴቲክ አሲድ.

የሙከራ ዘዴd

1) ሽፋኑን አዘጋጁ: ሽፋኑን ወደ ባርቢቶል ቋት መፍትሄ 30min-8h ውስጥ አስገባ እና ያውጡት, ተጨማሪውን መፍትሄ በሚስብ ወረቀት ያስወግዱት.

2) የመጫኛ ናሙናዎች፡ የሽፋኑን ሸካራ ጎን እና ለስላሳ ጎን ይለዩ እና በ 1.5 ሴ.ሜ ርቀት ላይ ወደ ላይኛው ጫፍ በሸካራው በኩል ያለውን መስመር ምልክት ያድርጉ።በላቁ የናሙና መጫኛ መሳሪያ ናሙናዎችን በሸካራ ጎኑ ይጫኑ።ማሳሰቢያ፡- ናሙናዎቹ በገለባው ሽፋን ላይ መጫን አለባቸው።የሴረም ናሙናዎች ሙሉ በሙሉ ወደ ሽፋኑ ውስጥ ዘልቀው ከገቡ በኋላ ሽፋኑን ያዙሩት, ሻካራውን ጎን (በናሙናዎች) ፊት ለፊት ወደ ማጠራቀሚያው ያስቀምጡ እና የመጨረሻው ጫፍ በአሉታዊ ኤሌክትሮድስ ውስጥ ይቀመጣል.

3) Electrophoresis: የኃይል አቅርቦቱን ያብሩ, 0.4～0.6m A/cm membrane, የሩጫው ጊዜ ከ30-45 ደቂቃዎች ነው.ኤሌክትሮፊዮሬሲስን ካካሄዱ በኋላ ኃይሉን ያጥፉ.

4) እድፍ እና ንፁህ፡- ሽፋኑን ከታንኩ ውስጥ አውጥተው አስጠመቁit ወደ ማቅለሚያው መፍትሄ ለ 5 ደቂቃዎች, እና ከዚያም የጀርባው ቀለም ግልጽ እስኪሆን ድረስ ለ 3-4 ጊዜ በንጽሕና መፍትሄ ውስጥ ደጋግመው ያጽዱ.የሴረም ፕሮቲኖች በባንዶች ላይ መታየት አለባቸው, እና በመደበኛነት አምስት ዞኖች አሉ, እስከ ምልክት ባለው መስመር ላይ ከላይኛው ጫፍ ይመሰርታሉ, Albumin, α1-gloulin, α2-gloulin, β-gloulin, γ-gloulin.

5) ማቆየት: የደረቀውን ኤሌክትሮፊዮራይዝስ ያስቀምጡባንድለ 10-15 ደቂቃዎች በንጽህና መፍትሄ ውስጥ, እና ከዚያ አውጥተው በንጹህ መስታወት ላይ ይለጥፉ, ከደረቀ በኋላ, ግልጽነት ያለው ፊልም ይሆናል.ባንድ.

ሙከራውጤት

የሴረም ናሙናዎች የመለየት ውጤት ጥሩ ነው, እና ምንም የባንድ ጭራ ክስተት የለም.በፈተና ሂደቶች እና በተሞካሪው ዘዴዎች ምክንያት የውጤቶቹ ተደጋጋሚነት ይለያያል, እና የመድገም ችሎታው ከፍተኛ ነው.

ማጠቃለያ

ፈጣን ክሊኒካዊ ኤሌክትሮፊዮራይዝስ ማወቂያ ስርዓት (ኤሌክትሮፊዮሬሲስ ታንክDYCP-38C፣ገቢ ኤሌክትሪክDYY-6C እና የላቀ የናሙና ጭነት WD-9404) በእኛ የተሰራኩባንያ ቤጂንግ ሊዩ ባዮቴክኖሎጂ Co., Ltdየሙከራ መስፈርቶችን ያሟላል ፣እናውጤቶቹ ሊባዙ የሚችሉ, ቀላል እና ፈጣን, ተስማሚ ናቸውማስተማርምርምር.

ቤጂንግ ሊዩባዮቴክኖሎጂ Co., Ltd ለሕይወት ሳይንስ ኢንዱስትሪ ኤሌክትሮፊዮራይዝስ ምርቶችን በማምረት ላይ ያተኮረ ነው.በቻይና ውስጥ ከ 50 ዓመት በላይ ታሪክ ያለው እና ኩባንያው የተረጋጋ እና ከፍተኛ ጥራት ያላቸውን ምርቶች በመላው ዓለም ማቅረብ ይችላል.በዕድገት ዓመታት ውስጥ, ለእርስዎ ምርጫ ብቁ ነው!

አሁን አጋሮችን እየፈለግን ነው, ሁለቱም የኦሪጂናል ዕቃ አምራች ኤሌክትሮፊሸሮች ታንክ እና አከፋፋዮች እንኳን ደህና መጡ.

ስለእኛ ተጨማሪ መረጃ እባክዎን በኢሜል ያግኙን።[ኢሜል የተጠበቀ]ወይም[ኢሜል የተጠበቀ].